Als Titian 1542 Opferung Isaaks malte, war er bereits in ganz Europa gefeiert, aber die genauen Umstände dieses Auftrags bleiben ein Rätsel. Sicher ist, dass die biblische Geschichte von Abraham und Isaac ein beliebtes Thema unter den Mäzenen der Renaissance geworden war, die darin eine kraftvolle Allegorie von Glauben und Gehorsam sahen. Im Gegensatz zu vielen Künstlern, die das Thema behandelten, wählte Titian den kritischen Moment, als Abraham, mit dem Messer in der Hand, vom Engel aufgehalten wird – ein Moment voller Spannung und göttlicher Intervention. In dem Gemälde ist Abrahams muskulöser Arm erhoben, die Klinge schwebt über dem gebundenen Isaac, dessen Gesicht sich vor Angst und Verwirrung verzieht.

Der Engel tritt von links in die Szene ein und ergreift Abrahams Handgelenk, um das Opfer zu stoppen. Der Widder, der in einem Dickicht gefangen ist, steht als das Ersatzopfer, seine Hörner im Gestrüpp verheddert. Licht strömt über die Figuren und beleuchtet Isaacs blasse Haut und die ausgestreckte Hand des Engels, während der Hintergrund in den Schatten zurückweicht.

Im Vergleich zu Caravaggios späterer und brutalerer Version ist Titians Interpretation von einem Gefühl von Bewegung und psychologischem Drama geprägt, wobei jede Geste und jeder Blick die emotionalen Einsätze der Geschichte verstärkt. Die frühe Provenienz des Gemäldes ist ungewiss, aber es ist typisch für Titians späte religiöse Werke, die sowohl von italienischen als auch von spanischen Sammlern begehrt waren. Im Laufe der Jahrhunderte durchlief Opferung Isaaks mehrere Adelskollektionen, wobei die Zuschreibung gelegentlich aufgrund der Existenz von Atelier-Repliken und Kopien von Nachfolgern in Frage gestellt wurde. Heute wird das Werk als authentisches Titian anerkannt, bewundert für seine dynamische Komposition und malerische Pinselführung.

Es steht als Zeugnis für die Fähigkeit des Künstlers, vertraute biblische Erzählungen mit neuem Leben und psychologischer Tiefe zu erfüllen, auch wenn die Details seines ursprünglichen Mäzens und seiner Reise teilweise von der Geschichte verhüllt bleiben.