Quando Tiziano dipinse L'Agonia nel giardino nel 1558, era già famoso in tutta Europa, ma quest'opera si distingue per il suo approccio insolitamente personale a un soggetto spesso trattato con grandezza. Invece di una narrazione ampia, Tiziano scelse una scena intima e notturna, concentrandosi sulla lotta silenziosa di Cristo nel Getsemani. La data del dipinto lo colloca nella fase tardiva della carriera dell'artista, quando il suo tratto divenne più sciolto e i suoi colori più atmosferici — un cambiamento che avrebbe influenzato generazioni di pittori.

Inusualmente, non è registrato alcun incarico originale per quest'opera, e la sua provenienza iniziale rimane incerta, aggiungendo alla sua aura di mistero. Il momento scelto da Tiziano è quello in cui Cristo si inginocchia in preghiera, pochi istanti prima del suo arresto, mentre i suoi discepoli dormono nelle vicinanze, ignari della sua angoscia. Un angelo scende dall'oscurità, offrendo un calice — un simbolo della sofferenza che Cristo deve accettare. I blu profondi e i verdi ombrosi del giardino avvolgono le figure, mentre il volto e le mani illuminate di Cristo attirano lo sguardo verso la sua solitudine e determinazione.

I discepoli, accasciati per la stanchezza, sono resi in un focus più morbido, la loro vulnerabilità contrasta con la postura tesa di Cristo. A differenza della precedente e più strutturata Agonia nel giardino di Andrea Mantegna, Tiziano dissolve le forme nella notte, enfatizzando l'emozione piuttosto che la chiarezza. La storia precoce del dipinto è oscura; non si sa con certezza chi lo possedesse per primo o come sia viaggiato, sebbene nel XVII secolo fosse registrato in Spagna. Oggi, è appeso al Museo del Prado, dove è considerato un esempio chiave dell'opera religiosa tardiva di Tiziano.

La gestione sciolta e la palette malinconica segnano un allontanamento dal suo stile precedente, più rifinito, riflettendo la visione in evoluzione dell'artista negli ultimi anni. Sebbene il medium non sia documentato in modo definitivo, la superficie pittorica dell'opera e il suo colore luminoso sono tratti distintivi della tecnica veneziana di Tiziano. La sua presenza al Prado sottolinea l'ammirazione spagnola duratura per la pittura veneziana e per Tiziano in particolare.