Quando Tiziano pintou A Agonia no Jardim em 1558, já era famoso em toda a Europa, mas esta obra se destaca por sua abordagem incomumente pessoal a um tema frequentemente tratado com grandeza. Em vez de uma narrativa abrangente, Tiziano escolheu uma cena íntima e noturna, focando na luta silenciosa de Cristo no Getsêmani. A data da pintura a coloca na fase tardia da carreira do artista, quando sua pincelada se tornou mais solta e suas cores mais atmosféricas — uma mudança que influenciaria gerações de pintores.

Incomum, não há um comissionamento original firmemente registrado para esta obra, e sua proveniência inicial permanece incerta, acrescentando à sua aura de mistério. O momento que Tiziano seleciona é o instante em que Cristo se ajoelha em oração, momentos antes de sua prisão, enquanto seus discípulos dormem nas proximidades, alheios à sua angústia. Um anjo desce da escuridão, oferecendo um cálice — um símbolo do sofrimento que Cristo deve aceitar. Os azuis profundos e os verdes sombrios do jardim envolvem as figuras, enquanto o rosto e as mãos iluminadas de Cristo atraem o olhar para seu isolamento e determinação.

Os discípulos, desabados de exaustão, são representados em um foco mais suave, sua vulnerabilidade contrastando com a postura tensa de Cristo. Ao contrário da anterior e mais estruturada Agonia no Jardim de Andrea Mantegna, Tiziano dissolve as formas na noite, enfatizando a emoção em vez da clareza. A história inicial da pintura é obscura; não se sabe ao certo quem a possuía primeiro ou como ela viajou, embora no século XVII tenha sido registrada na Espanha. Hoje, ela está exposta no Museu do Prado, onde é considerada um exemplo chave da obra religiosa tardia de Tiziano.

O manejo solto e a paleta melancólica marcam uma mudança em relação ao seu estilo anterior, mais polido, refletindo a visão em evolução do artista em seus últimos anos. Embora o meio não esteja documentado de forma definitiva, a superfície pictórica da obra e sua cor radiante são marcas da técnica veneziana de Tiziano. Sua presença no Prado sublinha a admiração espanhola duradoura pela pintura veneziana, e por Tiziano em particular.