Um jovem armado com um arco e acompanhado por um cachorro irrompe em uma cena isolada, surpreendendo um grupo de mulheres nuas reunidas em torno de uma fonte de pedra sob os arcos de um templo em ruínas na floresta. A figura central, pálida e coroada com uma lua crescente, está sendo protegida por uma mulher de pele mais escura à direita, enquanto as outras ninfas reagem alarmadas, torcendo-se para se cobrir ou voltando-se para a deusa em busca de orientação. Diana e Acteon mostra o momento das Metamorfoses de Ovídio quando Acteon, após caçar, encontra a deusa Diana e suas ninfas, um encontro que levará à sua transformação e morte.

Ticiano situa esse drama mitológico não em um claro da floresta, mas nas ruínas arqueadas de um templo, ajustando o cenário tradicional para aumentar a sensação de intrusão e violação sagrada. Esta pintura faz parte da célebre série de poesias do artista e foi criada na década de 1550, juntamente com Diana e Calisto, utilizando o mesmo estilo e abordagem para ambas as obras.