Ein junger Mann, bewaffnet mit einem Bogen und begleitet von einem Hund, stürzt in eine abgelegene Szene und erschreckt eine Gruppe nackter Frauen, die sich um einen Steinbrunnen unter den Bögen eines zerstörten Tempels im Wald versammelt haben. Die zentrale Figur, blass und mit einem Halbmond gekrönt, wird von einer dunklerhäutigen Frau ganz rechts geschützt, während die anderen Nymphen alarmiert reagieren, sich drehen, um sich zu bedecken, oder sich an die Göttin um Rat wenden. Diana und Actaeon zeigt den Moment aus Ovids Metamorphosen, als Actaeon, nach der Jagd, auf die badende Göttin Diana und ihre Nymphen stößt, eine Begegnung, die zu seiner Verwandlung und seinem Tod führen wird.

Tizian platziert dieses mythologische Drama nicht in einer Waldlichtung, sondern in den gewölbten Ruinen eines Tempels und passt den traditionellen Schauplatz an, um das Gefühl von Eindringen und heiliger Verletzung zu verstärken. Dieses Gemälde ist Teil der gefeierten Poesie-Serie des Künstlers und wurde in den 1550er Jahren geschaffen, zusammen mit Diana und Callisto, wobei für beide Werke der gleiche Stil und Ansatz verwendet wurde.