Un joven armado con un arco y acompañado por un perro irrumpe en una escena apartada, sorprendiendo a un grupo de mujeres desnudas reunidas alrededor de una fuente de piedra bajo los arcos de un templo en ruinas en el bosque. La figura central, pálida y coronada con una luna creciente, está siendo protegida por una mujer de piel más oscura a la derecha, mientras que las otras ninfas reaccionan alarmadas, torciéndose para cubrirse o volviendo hacia la diosa en busca de orientación. Diana y Acteón muestra el momento de las Metamorfosis de Ovidio cuando Acteón, tras cazar, se topa con la diosa Diana y sus ninfas, un encuentro que llevará a su transformación y muerte.

Tiziano sitúa este drama mitológico no en un claro del bosque, sino en las ruinas arqueadas de un templo, ajustando el escenario tradicional para aumentar la sensación de intrusión y violación sagrada. Esta pintura es parte de la célebre serie de poesías del artista y fue creada en la década de 1550, junto a Diana y Calisto, utilizando el mismo estilo y enfoque para ambas obras.