À beira de um lago na floresta, um grupo de mulheres circunda uma figura reclinada, algumas estendendo a mão em direção a ela, outras recuando, enquanto uma mulher coroada gesticula em acusação e cães de caça descansam nas proximidades. Diana e Calisto mostra o momento em que a deusa Diana descobre a gravidez de Calisto, conforme narrado nas Metamorfoses de Ovídio. Tiziano pintou esta cena como parte de uma série de obras mitológicas, as 'poesias', para Filipe II da Espanha.

A pintura é exibida alternativamente entre Londres e Edimburgo, após a compra conjunta pela National Gallery e pelas National Galleries Scotland. Existe uma versão posterior de Tiziano e seu ateliê em Viena, mas esta tela foi concluída entre 1556 e 1559. A composição pertence à escola veneziana, conhecida por suas cores vibrantes e pelo tratamento dinâmico de temas mitológicos.