En el borde de un estanque del bosque, un grupo de mujeres rodea a una figura reclinada, algunas extendiendo la mano hacia ella, otras retrocediendo, mientras una mujer coronada gesticula en acusación y unos perros de caza descansan cerca. Diana y Calisto muestra el momento en que la diosa Diana descubre el embarazo de Calisto, tal como se narra en las Metamorfosis de Ovidio. Tiziano pintó esta escena como parte de una serie de obras mitológicas, las 'poesías', para Felipe II de España.

La pintura se exhibe alternativamente entre Londres y Edimburgo, tras su compra conjunta por la National Gallery y las National Galleries Scotland. Existe una versión posterior de Tiziano y su taller en Viena, pero este lienzo fue completado entre 1556 y 1559. La composición pertenece a la escuela veneciana, conocida por su color vibrante y su tratamiento dinámico de temas mitológicos.