Al bordo di uno stagno nel bosco, un gruppo di donne circonda una figura reclinata, alcune allungando la mano verso di lei, altre indietreggiando, mentre una donna coronata gesticola in accusa e dei cani da caccia riposano nelle vicinanze. Diana e Callisto mostra il momento in cui la dea Diana scopre la gravidanza di Callisto, come narrato nelle Metamorfosi di Ovidio. Tiziano dipinse questa scena come parte di una serie di opere mitologiche, le 'poesie', per Filippo II di Spagna.

Il dipinto è esposto alternativamente tra Londra ed Edimburgo, dopo l'acquisto congiunto da parte della National Gallery e delle National Galleries Scotland. Esiste una versione successiva di Tiziano e del suo laboratorio a Vienna, ma questa tela è stata completata tra il 1556 e il 1559. La composizione appartiene alla scuola veneziana, nota per i suoi colori vivaci e il trattamento dinamico dei soggetti mitologici.