Am Rand eines Waldteichs umkreist eine Gruppe von Frauen eine liegende Figur, einige greifen nach ihr, andere weichen zurück, während eine gekrönte Frau anklagend gestikuliert und Jagdhunde in der Nähe ruhen. Diana und Callisto zeigt den Moment, als die Göttin Diana Callistos Schwangerschaft entdeckt, wie in Ovids Metamorphosen erzählt. Titian malte diese Szene als Teil einer Reihe mythologischer Werke, den 'Poesien', für Philipp II.

von Spanien. Das Gemälde wird abwechselnd in London und Edinburgh ausgestellt, nachdem es gemeinsam von der National Gallery und den National Galleries Scotland erworben wurde. Eine spätere Version von Titian und seiner Werkstatt existiert in Wien, aber diese Leinwand wurde zwischen 1556 und 1559 vollendet.

Die Komposition gehört zur venezianischen Schule, die für ihre lebendige Farbe und die dynamische Behandlung mythologischer Themen bekannt ist.