Maria sitzt im Zentrum eines vergoldeten Thrones und hält das Christkind auf ihrem Schoß, umgeben von Reihen von Engeln und Heiligen, die sie ehrfurchtsvoll ansehen. Die Figuren von Maria und dem Christkind sind viel größer als die umliegenden Heiligen und Engel, was ihre Bedeutung durch die Größe betont. Der Thron ist kunstvoll mit bunten Marmor-Mustern und gotischen Architekturelementen dekoriert, während der goldene Hintergrund und die Heiligenscheine an die italo-byzantinische Tradition erinnern.

Diese Szene, bekannt als Maestà, wurde für den Hochaltar der Ognissanti-Kirche in Florenz gemalt, ein Auftrag für den Orden der Humiliati. Dokumente aus dem frühen 15. Jahrhundert und die Autobiografie von Lorenzo Ghiberti schreiben dieses Werk speziell Giotto zu.

Madonna Enthroned wird als ein Schlüsselwerk der Proto-Renaissance anerkannt, das einen Übergang von der Flachheit der gotischen Kunst zu größerem Naturalismus und skulpturaler Präsenz markiert.