Marie se tient dans un jardin clos, tenant l'Enfant Christ alors qu'il presse sa joue contre la sienne, sa main gauche tenant un chapelet. Deux anges tiennent derrière elle un riche tissu d'honneur brodé en rouge, tandis qu'une fontaine s'élève au premier plan et que des roses fleurissent à ses pieds. Jan van Eyck a peint Madonna à la Fontaine en 1439, plaçant la Vierge dans un hortus conclusus, la fontaine symbolisant la source de la vie.

La robe bleue de la Madonna est inhabituelle pour van Eyck, qui la peignait plus souvent en rouge ; ce choix reflète l'influence italienne, car l'outremer était privilégié par les peintres italiens pour les vêtements de la Vierge. Les chapelets de l'Enfant Christ et le rosier font référence au rosaire, qui devenait de plus en plus populaire dans le nord de l'Europe à l'époque. C'est l'une des dernières œuvres signées et datées de van Eyck et, avec sa Madonna dans l'Église, elle montre la Vierge debout, un format influencé par les icônes byzantines et rare dans ses peintures antérieures.