Six hommes aveugles avancent en une ligne précaire le long d'un chemin de terre, chacun tenant un bâton et l'épaule de l'homme devant lui, tandis que le leader tombe en arrière dans un fossé et menace d'entraîner les autres avec lui. Les figures sont rendues avec un détail frappant, leurs visages tournés vers le haut et leurs yeux marqués par des afflictions visibles, tandis qu'une église s'élève en arrière-plan et qu'un berger se tient près de la berge. Les aveugles guidant les aveugles tire son sujet de la parabole biblique de Matthieu 15:14, élargissant l'histoire pour montrer six hommes aveugles au lieu de deux, et les plaçant dans des vêtements bien faits plutôt que dans des habits de paysans.

La peinture a été achevée en 1568 par Pieter Bruegel l'Ancien, un an avant sa mort, et est considérée comme un chef-d'œuvre d'observation et de composition dans la peinture néerlandaise précoce. L'église en arrière-plan est identifiée comme Sint-Anna, un détail qui a suscité des interprétations à la fois pro et anti-catholiques, bien que l'intention de la peinture reste incertaine.