Uma jovem senta-se em vista de três quartos diante de uma loggia aberta, seu olhar pálido encontra o do espectador enquanto embala um pequeno unicórnio em seus braços. O unicórnio, um símbolo de castidade, sugere que o retrato foi concebido para exibir a virtude da modelo e sua adequação para o casamento. A composição ecoa de perto a Mona Lisa de Leonardo, com a figura emoldurada por colunas e uma paisagem distante, no entanto, a expressão da modelo é descrita como fria e atenta, em vez de enigmática.

A análise técnica revelou que Rafael originalmente esboçou um pequeno cachorro—um emblema de fidelidade—sob o unicórnio, mas deixou-o inacabado e o substituiu pela criatura mítica. No século XVII, a pintura foi amplamente repintada para transformar a modelo em Santa Catarina de Alexandria, mas a restauração do século XX removeu essas adições e restaurou a visão original de Rafael. Pintado por volta de 1505–1506, Retrato de uma jovem com um unicórnio está no limiar do período maduro do Alto Renascimento de Rafael, refletindo seu envolvimento com o retrato florentino contemporâneo.