Eine junge Frau sitzt im Dreiviertelansicht vor einer offenen Loggia, ihr blasser Blick trifft den des Betrachters, während sie ein kleines Einhorn in ihren Armen wiegt. Das Einhorn, ein Symbol der Keuschheit, deutet darauf hin, dass das Porträt dazu gedacht war, die Tugend der Dargestellten und ihre Eignung für die Ehe zu zeigen. Die Komposition erinnert stark an Mona Lisa von Leonardo, mit der Figur, die von Säulen und einer fernen Landschaft umrahmt wird, doch der Ausdruck der Dargestellten wird als kühl und wachsam beschrieben, anstatt rätselhaft zu sein.

Technische Untersuchungen ergaben, dass Raphael ursprünglich einen kleinen Hund—ein Emblem der Treue—unter dem Einhorn skizzierte, ihn jedoch unvollendet ließ und durch das mythische Wesen ersetzte. Im siebzehnten Jahrhundert wurde das Gemälde stark übermalt, um die Dargestellte in die Heilige Katharina von Alexandrien zu verwandeln, aber die Restaurierung im zwanzigsten Jahrhundert entfernte diese Zusätze und stellte Raphaels ursprüngliche Vision wieder her. Um 1505–1506 gemalt, steht Porträt einer jungen Frau mit einem Einhorn an der Schwelle zu Raphaels reifer Hochrenaissance-Periode und spiegelt sein Engagement für die zeitgenössische florentinische Porträtkunst wider.