Poche storie bibliche hanno ispirato tanta rivalità artistica e fascinazione quanto la storia di Giuditta, e Giuditta con la testa di Oloferne di Rosso Fiorentino si distingue per la sua intensa carica psicologica. A differenza delle rappresentazioni più serene o trionfanti dei suoi contemporanei, Rosso ha scelto di immergere lo spettatore nelle tensioni del momento successivo all'atto, un istante che il pubblico rinascimentale avrebbe riconosciuto sia come eroico che inquietante. La data del dipinto e il suo committente originale rimangono incerti, aggiungendo un'aria di mistero e invitando a speculazioni sul suo messaggio e sul pubblico previsto. Giuditta, la vedova diventata eroina, ha appena decapitato il generale assiro Oloferne per salvare la sua città assediata di Betulia.

Nella visione di Rosso Fiorentino, lei si trova a impugnare la spada, con un'espressione che oscilla tra l'esaurimento e la ferma determinazione, mentre la testa decapitata di Oloferne pesa nella sua mano. I forti contrasti di luce e ombra scolpiscono i tratti tesi di Giuditta, e il rosso vivido del suo abito evoca sia la violenza che il sacrificio. A differenza della successiva e più teatrale Giuditta che decapita Oloferne di Caravaggio, la Giuditta di Rosso è meno un angelo vendicatore che una donna gravata dal peso della sua azione, con lo sguardo distolto, invitando lo spettatore a contemplare il costo del suo coraggio. Sebbene si sappia poco sulla vita precoce di questo dipinto, esso è caratteristico del periodo manierista di Rosso Fiorentino, contraddistinto da forme allungate e dramma emotivo.

La mancanza di documentazione riguardo al suo incarico o alla sua proprietà iniziale ha portato gli studiosi a collocarlo all'interno di una tradizione più ampia di interpretazioni fiorentine di Giuditta, notando le affinità stilistiche con opere che Rosso produsse dopo il suo ritorno da Roma. Oggi, la provenienza precisa del dipinto rimane poco chiara, ma il suo stile audace e la sua profondità psicologica assicurano il suo posto come un esempio significativo del contributo di Rosso Fiorentino al linguaggio visivo in evoluzione del primo cinquecento.