Немногие библейские истории вдохновляли на такое количество художественных споров и увлечений, как история Иудифь, и Иудифь с головой Холоферна Россо Фиорентино выделяется своей яркой психологической интенсивностью. В отличие от более спокойных или триумфальных изображений его современников, Россо выбрал погрузить зрителя в напряженные последствия этого акта, момент, который зрители эпохи Ренессанса признали бы как героический и тревожный. Дата создания картины и её первоначальный покровитель остаются неясными, что добавляет ей атмосферу загадки и вызывает спекуляции о её предполагаемом послании и аудитории. Иудифь, вдова, ставшая героиней, только что обезглавила ассирийского генерала Холоферна, чтобы спасти свой осажденный город Ветулию.

В видении Россо Фиорентино она стоит, крепко держа меч, её выражение лица колеблется между усталостью и решимостью, в то время как отрубленная голова Холоферна тяжело лежит в её руке. Резкие контрасты света и тени вырезают напряженные черты Иудифь, а ярко-красный цвет её одежды отзывается как на насилие, так и на жертву. В отличие от более театральной Иудифь, обезглавливающей Холоферна Караваджо, Иудифь Россо менее похожа на ангела-мести, чем на женщину, обременённую тяжестью своего поступка, её взгляд отвёрнут, приглашая зрителя задуматься о цене её мужества. Хотя о ранней жизни этой картины известно немного, она характерна для маньеристского периода Россо Фиорентино, отмеченного удлинёнными формами и эмоциональной драмой.

Отсутствие документации о её заказе или раннем владении привело учёных к тому, чтобы поместить её в более широкую традицию флорентийских интерпретаций Иудифь, отмечая её стилистические связи с работами, которые Россо создал после своего возвращения из Рима. Сегодня точное происхождение картины остаётся неясным, но её смелый стиль и психологическая глубина обеспечивают ей место как яркому примеру вклада Россо Фиорентино в развивающийся визуальный язык начала шестнадцатого века.