Юдифь, одетая в синий, наклоняется вперед с решительной силой, когда она пилит шею Холоферна. Ее левая рука крепко держит его за волосы, в то время как ее служанка Абра удерживает его борющееся тело; кровь течет по белым простыням и переливается через край кровати. Сцена плотно скомпонована, фигуры близко прижаты друг к другу и освещены резким направленным светом, который подчеркивает их лица и руки на фоне окружающей тьмы.

Юдифь, убивающая Холоферна берет свой сюжет из Книги Юдифи, показывая израильскую героиню и ее служанку в момент убийства ассирийского генерала Холоферна, когда он уснул, как описано в библейской истории. Артемизия Джентилески завершила эту картину в 1612-1613 годах, и сейчас она признана одной из ее самых знаковых работ. Ученые отмечают, что композиция Джентилески подчеркивает активную физическую роль Юдифи, отличая ее от более ранних изображений мужских художников и выделяя темы женской агентности и силы в барочной религиозной живописи.