Ein barfüßiges Christkind, unterstützt von Maria, tritt vor, um seinen Fuß auf eine große Schlange zu drücken, während die Heilige Anna neben ihnen steht, die Hände gefaltet und den Kopf mit einem Tuch bedeckt. Caravaggio malt die Jungfrau mit braunem Haar, das zu einem Dutt gebunden ist, ihr Kleid enthüllt einen Teil ihrer Brust, und die Heilige Anna als ältere Frau mit einem Kopftuch, was von den traditionellen idealisierten Darstellungen abweicht. Im Jahr 1605 für den Altar der Erzbruderschaft der Papalen Bräutigame in St. Peter in Auftrag gegeben, wurde das Gemälde nach einer kurzen Ausstellung entfernt, angeblich wegen seiner unorthodoxen Darstellung der Figuren und der Nacktheit des Christkindes.

Das Werk wurde dann von Kardinal Scipione Borghese erworben und befindet sich jetzt in seinem ehemaligen Palast. Madonna and Child with Saint Anne wird als reifes Werk von Caravaggio und als auffälliges Beispiel für die italienische Barockmalerei anerkannt.