Um Menino Cristo descalço, apoiado por Maria, avança para pressionar seu pé sobre uma grande serpente, enquanto Santa Ana está ao lado deles, com as mãos unidas e a cabeça coberta por um lenço. Caravaggio pinta a Virgem com cabelo castanho preso em um coque, seu vestido revela parte de seu seio, e Santa Ana como uma mulher mais velha com um lenço na cabeça, afastando-se das representações idealizadas tradicionais. Encomendada em 1605 para o altar da Arquiconfraria dos Noivos Papais em São Pedro, a pintura foi removida após uma breve exibição, supostamente devido à sua representação não ortodoxa das figuras e à nudez do Menino Cristo. A obra foi então adquirida pelo Cardeal Scipione Borghese e agora está em seu antigo palácio.

Madonna and Child with Saint Anne é reconhecida como uma obra madura de Caravaggio e um exemplo marcante da pintura barroca italiana.