Un Bambino Cristo scalzo, sostenuto da Maria, avanza per premere il suo piede su un grande serpente, mentre Santa Anna si trova accanto a loro, con le mani giunte e la testa coperta da un foulard. Caravaggio dipinge la Vergine con i capelli castani raccolti in un chignon, il suo vestito rivela parte del suo seno, e Santa Anna come una donna più anziana con un foulard, allontanandosi dalle rappresentazioni idealizzate tradizionali. Commissionata nel 1605 per l'altare dell'Arciconfraternita degli Sposi Papali in San Pietro, l'opera fu rimossa dopo una breve esposizione, apparentemente a causa della sua rappresentazione non ortodossa delle figure e della nudità del Bambino Cristo. L'opera fu poi acquisita dal Cardinale Scipione Borghese e si trova ora nel suo ex palazzo.

Madonna and Child with Saint Anne è riconosciuta come un'opera matura di Caravaggio e un esempio straordinario della pittura barocca italiana.