Un Enfant Christ pieds nus, soutenu par Marie, avance pour poser son pied sur un grand serpent, tandis que Sainte Anne se tient à leurs côtés, les mains jointes et la tête couverte d'un foulard. Caravaggio peint la Vierge avec des cheveux bruns rassemblés en chignon, sa robe révélant une partie de sa poitrine, et Sainte Anne comme une femme plus âgée avec un foulard, s'éloignant des représentations idéalisées traditionnelles. Commandée en 1605 pour l'autel de l'Archiconfrérie des Époux Papaux à Saint-Pierre, la peinture a été retirée après une brève exposition, apparemment en raison de sa représentation non orthodoxe des figures et de la nudité de l'Enfant Christ. L'œuvre a ensuite été acquise par le Cardinal Scipione Borghese et se trouve maintenant dans son ancien palais.

Madonna and Child with Saint Anne est reconnue comme une œuvre mature de Caravaggio et un exemple frappant de la peinture baroque italienne.