Un Niño Cristo descalzo, apoyado por María, avanza para presionar su pie sobre una gran serpiente, mientras Santa Ana se encuentra a su lado, con las manos unidas y la cabeza cubierta con un pañuelo. Caravaggio pinta a la Virgen con el cabello castaño recogido en un moño, su vestido revela parte de su pecho, y a Santa Ana como una mujer mayor con un pañuelo en la cabeza, alejándose de las representaciones idealizadas tradicionales. Encargada en 1605 para el altar de la Archicofradía de los Novios Papales en San Pedro, la pintura fue retirada tras una breve exhibición, supuestamente debido a su representación poco ortodoxa de las figuras y la desnudez del Niño Cristo. La obra fue adquirida posteriormente por el Cardenal Scipione Borghese y ahora se encuentra en su antiguo palacio.

Madonna and Child with Saint Anne es reconocida como una obra madura de Caravaggio y un ejemplo impactante de la pintura barroca italiana.