Aucun autre artiste de son époque n'a peint autant de versions de la Madonna et de l'Enfant que El Greco, et pourtant, Madone et Enfant avec Sainte Martine et Sainte Agnès se distingue par son association de la Vierge avec deux saintes rarement vues ensemble. Les origines de la peinture sont entourées d'incertitude : sa date, son emplacement d'origine et son commanditaire sont tous débattus par les chercheurs, et aucune documentation contemporaine n'a encore émergé. Ce qui est certain, c'est que l'iconographie inhabituelle de l'œuvre a suscité des spéculations : était-elle destinée à une chapelle privée dédiée à ces saintes, ou peut-être commandée par un mécène ayant une dévotion particulière envers elles ? Au cœur de la toile, la Madonna est assise sur un trône, sa silhouette allongée et ses drapés tourbillonnants étant indéniablement El Greco.

Elle regarde vers le bas l'Enfant Jésus, qui bénit le spectateur d'un geste à la fois tendre et solennel. À sa droite se tient Sainte Martina, tenant une palme de martyre avec un lion à ses pieds, un clin d'œil à sa légendaire survie dans l'arène. À gauche se trouve Sainte Agnès, identifiée par l'agneau qu'elle berce, symbolisant sa pureté et son sacrifice.

La composition est chargée d'énergie verticale, les figures s'élevant en une colonne de lumière contre un ciel orageux, un procédé que El Greco utilisait souvent pour suggérer une ascension spirituelle. Comparées aux Madonnas sereines de Raphaël, ici les saintes sont agitées, leurs formes presque enflammées par un fervent intérieur. L'histoire ultérieure de la peinture est aussi énigmatique que ses origines.

Elle n'a été fermement attribuée à El Greco qu'au XXe siècle, lorsque les chercheurs ont reconnu son coup de pinceau caractéristique et sa palette de couleurs. L'œuvre a changé de mains plusieurs fois, passant par des collections privées avant d'entrer dans un grand musée. Aujourd'hui, elle est considérée comme un exemple tardif du style mûr de El Greco, marqué par ses allongements caractéristiques et sa couleur visionnaire.

Son association de deux martyres féminines aux côtés de la Vierge reste unique dans son œuvre, offrant un aperçu des goûts dévotionnels de l'Espagne de la fin du XVIe siècle et des mystères durables des commandes de El Greco.