Солдат и женщина противостоят пожилому мужчине в тускло освещенной комнате; она указывает на него, в то время как он отступает, подняв руки в тревожном отрицании. Отречение святого Петра показывает момент, когда Петр отрицает, что знает Иисуса, после ареста, с изображением святого Петра, солдата и женщины в полуросте и в натуральную величину. Караваджо завершил эту работу около 1610 года, вероятно, в Неаполе, и она считается одной из его последних двух картин.

Картина вскоре попала в руки художника Гвидо Рени, который использовал ее для погашения долгов в 1613 году, и ее влияние можно увидеть в работах Хосе де Риберы и Лионелло Спада. Отречение святого Петра принадлежит к барочной художественной эпохе, а ее драматическая композиция и освещение характерны для позднего стиля Караваджо.