Un soldado y una mujer confrontan a un hombre mayor en una habitación tenuemente iluminada; ella le señala mientras él se echa atrás, con las manos levantadas en una negación ansiosa. La Negación de San Pedro muestra el momento en que Pedro niega conocer a Jesús tras el arresto, con San Pedro, un soldado y una mujer representados a media longitud y del tamaño de la vida. Caravaggio completó esta obra alrededor de 1610, probablemente en Nápoles, y se considera una de sus dos últimas pinturas.

La pintura pronto pasó a manos del pintor Guido Reni, quien la utilizó para saldar deudas en 1613, y su influencia se puede ver en obras de José de Ribera y Lionello Spada. La Negación de San Pedro pertenece al movimiento barroco, y su composición dramática y su iluminación son características del estilo tardío de Caravaggio.