Quando El Greco chegou à Espanha em 1577, trouxe consigo um estilo que logo inquietaria e fascinaria seus patronos. Entre as comissões mais antigas e intrigantes de seus anos espanhóis está A Imaculada Conceição com São João Evangelista, pintada por volta de 1580. Esta obra se destaca porque combina duas devoções poderosas: a pureza imaculada de Maria e o testemunho visionário de São João, em uma única e turbulenta composição.

Poucos artistas antes de El Greco ousaram fundir esses temas com tanta ousadia, e a iconografia incomum da pintura gerou debates entre os estudiosos sobre seu propósito original. A cena captura a Virgem Maria no momento de sua Imaculada Conceição, ascendendo ao céu, com as mãos unidas em humildade, cercada por uma multidão de anjos. Abaixo dela, São João Evangelista olha para cima, com seu livro aberto, como se estivesse registrando uma visão concedida apenas a ele. A lua crescente sob os pés de Maria e a coroa de estrelas sobre sua cabeça vêm diretamente da visão apocalíptica no Livro do Apocalipse, enquanto os lírios e rosas a seus pés simbolizam pureza e amor divino.

As figuras alongadas e a pincelada vibrante de El Greco diferenciam sua interpretação da clareza serena de artistas anteriores como Murillo, cujas posteriores Imaculadas Conceições se tornariam o padrão espanhol. Aqui, o drama reside na ascensão das formas e na intensa cor, quase sobrenatural. Pouco se sabe sobre a história inicial da pintura, e o patrono original permanece incerto, um destino comum para as comissões de El Greco durante seu período em Toledo. É provável que a obra tenha sido destinada a uma capela privada ou a uma confraria religiosa dedicada à Virgem.

Ao longo dos séculos, a pintura mudou de mãos várias vezes, em um momento foi mal atribuída e quase se perdeu entre obras menores do final do Renascimento. Hoje, A Imaculada Conceição com São João Evangelista é reconhecida como um exemplo chave do estilo espanhol inicial de El Greco, uma ponte entre sua formação veneziana e a arte visionária que ele criaria em Toledo.